凝膠過濾（分子篩層析或凝膠層析）原理和實(shí)驗(yàn)方法

凝膠層析又稱為分子篩層析或凝膠過濾。具有分子篩作用的物質(zhì)很多，如浮石、瓊脂 、瓊脂 糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝膠等。以葡聚糖凝膠應(yīng)用zui廣，商品名是sephadex型號(hào)很多，從G₁₀ 到G₂₀₀ ，它的主要應(yīng)用范圍是：①分級(jí)分離各種抗原與抗體 ；② 去掉復(fù)合物中的小分子物質(zhì)。如除鹽、熒光素和游離的放射性同位素 以及水解的蛋白質(zhì)碎片；③分析血清 中的免疫復(fù)合物；④分子量的測(cè)定。
（一）原理
凝膠是一種多孔性的不帶表面電荷的物質(zhì)，當(dāng)帶有多種成分的樣品溶液在凝膠內(nèi)運(yùn)動(dòng)時(shí)，由于它們的分子量不同而表現(xiàn)出速度的快慢，在緩沖液洗脫時(shí)，分子量大的物質(zhì)不能進(jìn)入凝膠孔內(nèi)，而在凝膠間幾乎是垂直的向下運(yùn)動(dòng)，而分子量小的物質(zhì)則進(jìn)入凝膠孔內(nèi)進(jìn)行“繞道”運(yùn)行，這樣就可以按分子量的大小，先后流出凝膠柱，達(dá)到分離的目的。
（二）葡聚糖凝膠的種類與性能
葡聚糖又名右旋糖酐，在它們的長鏈間以三氯環(huán)氧丙烷交聯(lián)劑交聯(lián)而成。葡聚糖凝膠具有很強(qiáng)的吸水性，交聯(lián)度大，吸水性小，相反交聯(lián)度小，吸水性大。商品名以SephadexG表示，G值越小，交聯(lián)度越大，吸水性越小，G值越大，交聯(lián)度越小，吸水性就越大，二者呈反比關(guān)系，G值大約為吸水量的10倍。由此可以根據(jù)床體積而估算出葡聚糖凝膠干粉的用量。
表 1－8 Sephadex1的種類與特性

G₂₅ 、G₅₀ 有四種顆粒型號(hào)：粗（100µ~300µ）、中（50µ~150µ）、細(xì)（20µ~80µ）和超細(xì)（10µ~40µ）。_G75 ～G₂₀₀ 又有兩種顆粒型號(hào)：中（40µ～120µ），超細(xì)（10µ～40µ）。顆粒越細(xì)，流速越慢，分離效果越好。
表1－9 DEAE－纖維素與 Sephadex1比較